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核酸检测技术在常州地区献血筛查中的应用
 

作者:何亚琴 张建伟 杨爱龙   来源:常州市中心血站   发布时间:2011-07-22 10:00   点击率:9385

                 ——成功阻止一例带有HIV的血液制品流向医院

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    HBV、HCV和HIV的输血传播一直是国内外输血安全领域最关注的热点之一。虽然通过对血液进行输血相关病毒的抗原或抗体的检测,使输血传播疾病的发生率明显降低,但输血传播疾病仍时有发生[1]。其中,90%以上HBV和HIV的传播风险及75%以上HCV的传播风险来自于“窗口期”病毒感染[2]
     
    虽然现有的血清学方法(ELISA)还不能检测出处于血清转换前的“窗口期”的病毒感染,但近年来发展的高度敏感、特异的核酸扩增技术——NAT技术可以将HBV、HCV和HIV病毒的检测“窗口期”明显缩短[3]。研究表明,通过核酸检测,可将输血传播HBV、HCV和HIV的酶联免疫检测“窗口期”分别由原来的50、72和22 天[4]缩短25、59和11天[5],从而减少了病毒经输血传播的发生率,大大提高了输血和血液制品的安全。作为一种新型的筛查输血传播传染病因子的检测方法,核酸检测技术自1993年起已先后被欧美、日本以及我国香港等近20个国家和地区用来做献血者血液筛查。
     
    为进一步保证输血安全,提高血液质量,江苏省常州市中心血站作为卫生部指定首批15所核酸检测试点采供血机构之一,自2010年4月起采用罗氏诊断公司的COBAS Taqman方法对血站常规血清学检测合格的血液进行HBV、HCV和HIV的核酸检测,并已成功阻止了一例带有艾滋病毒的血液制品流向医院。
     
    核酸检测技术(NAT)灵敏度更高
     
    2010年4月至2011年3月期间,常州市中心血站采用罗氏诊断公司的cobas s201全自动核酸提取、扩增检测系统,对血站常规血清学检测HBsAg、抗HCV、抗HIV均为阴性的51,991份合格血液进行HIV、HCV和HBV三项联合筛查。经过进一步核酸筛查后发现:其中有53例核酸检测呈阳性,阳性检出率为0.1%。怀疑其中1例为HIV阳性,提示处于感染的早期窗口期。
     
    常州市中心血站将这53份核酸检测阳性标本送至卫生部临检中心确认,证实其中43例HBV DNA阳性和2例HCV RNA及HBV DNA阳性,1例HIV RNA阳性。对上述一名怀疑感染HIV的献血者,在献血后第20天和第35天用样本的再次混样模式三联合检测HBV、HCV、HIV核酸,ELISA发现HIV二次检测转阳、梅毒也转阳。由此证明核酸检测技术更为敏感。
     
    通过COBAS Taqman 6混样法检测出的2例HCV/HBV混合感染样本占总样本数量的0.003%,这个比例高于中国人群中的HCV感染比例。这再次证明了COBAS Taqman 6混样法的临床灵敏度是非常可靠的。
     
    此外,根据9例HBV阳性(含1例HBV/HCV混合阳性)样本的跟踪实验,有3例病毒含量升高,4例降低,2例大体持平,表明COBAS Taqman方法可检出处于窗口期不同阶段的乙肝病毒。更为重要的是:病毒载量试验检出了15例病毒浓度小于12 IU/ml的乙肝样本,而这15例样本最初是由6混样法检出的。证明了COBAS Taqman 6混样法的临床灵敏度非常高,远高于其分析灵敏度(3.8X6 IU/ml)。此发现也被泰国2009年48万人份的核酸检测试验[6]和2010年中国药品生物制品检定所关于两种进口核酸筛查试剂的质量评价的研究[7]所证实。
     
    核酸检测技术结合血清学方法形成输血安全“双保险”
     
    目前,常州城区年供红细胞12.6吨,人均用血量高达5.6毫升,居江苏省第一,并高于上海市的5.4毫升。从常州市中心血站对常州市无偿献血者血液标本做的核酸检测试验结果看,血清学筛查模式对于HBV、HCV和HIV的输血传播仍具有一定的残余风险,而核酸检测技术更为敏感,可以筛查出尚属于感染“窗口期”的样本。
     
    也有研究者认为,从检测靶物质分析,血清学检测指向抗原/抗体,核酸检测指向HIV/HCV RNA和HBV DNA,目前还没有证据明确显示病毒感染初期病毒RNA的有效增值时间与抗原/抗体出现时间之间的关系,故认为两种方法的检测结果有互补之效,而不是简单的重复。与血清学方法结合使用,可以减少输血传播疾病的风险,保障输血安全。
     
    因此,在对献血者的血液筛查中,核酸检测技术与血清学方法的结合使用可为输血安全形成“双保险”,降低输血所引发的疾病传播的可能性,进一步提高输血安全系数。